细胞实验-细胞-英瀚斯生物科技公司
小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistantacidphosphatase,TRAP染色鉴定和骨吸收功能检测,并进一步采用RT-PCR对破骨细胞标志酶***基质金属蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP和***蛋白酶K(CathepsinK)的表达进行检测结果共培养5天后可观TRAP(+)多核细胞形成13天TRAP(+)多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,随着培养时间的延长,陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志***TRAP在共培养3天时开始表达,而MMP-9和CathepsinK则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用显著诱导的破骨细胞具有噬骨能力,该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.选择实验外包公司需要注意哪些事项?报价报价单一定要有明细。规范的外包公司会根据实验方案里的各项内容进行核算报价,材料是多少、人工检测是多少,可以看到每一笔钱花在哪里,避免笼统的报价。另外注意不要一味地追求,做过实验的都知道实验成本,外包还需要考虑人工成本。如果价格过低,实验数据就难以保证可靠和来源了。当然报价也不能虚高,做好是能在有限的经费中尽量保证课题完整性。可以要求公司根据预算来调整优化方案,尽可能节约成本。2、快速脂质体转染法操作步骤如下[方法二]:(1)以5×105细胞/孔接种6孔板(或35mm培养皿)培养24小时,使其达到50~60%板底面积。(2)在试管中配制DNA/脂质体复合物方法如下:①在1mL无DMEM中稀释PSV2-neo质粒DNA或供体DNA。②旋转1秒钟,再加入脂质体悬液,旋转。③室温下放置5~10分钟,使DNA结合在脂质体上。(3)弃去细胞中的旧液,细胞实验,用1mL无DMEM洗细胞一次后弃去,向每孔中直接加入1mLDNA/脂质体复合物,37℃培养3~5小时。(4)再于每孔中加入20%FCS的DMEM,继续培养14~24小时,细胞,(5)吸出DMEM/DNA/脂质体混合物加入新鲜10%FCS的DMEM,2mL/孔,再培养24~48小时。(6)用细胞刮或消化法收集细胞,以备分析鉴定。3、稳定的脂质体转染方法如下:(1)接种细胞同前,***编辑技术,细胞长至50%板底面积可用于转染。(2)DNA/脂质体复合物制备转染细胞同前(2)、(3)步骤。(3)在每孔中加入1mL、20%FCS的DMEM,细胞系,37℃培养48小时。(4)吸出DMEM,用G418选择培养液稀释细胞,使细胞生长一定时间,筛选转染,方法参照细胞筛选法进行。细胞实验-细胞-英瀚斯生物科技公司由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司坚持“以人为本”的企业理念,拥有一支高素质的员工***,力求提供更好的产品和服务回馈社会,并欢迎广大新老客户光临惠顾,真诚合作、共创美好未来。英瀚斯——您可信赖的朋友,公司地址:江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学***大学科技园科创楼A301,联系人:戴经理。)
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