饲养层细胞制备于细胞融合前一天，准备饲养层细胞，常选用小鼠腹腔渗出细胞，其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔渗出细胞的好处是:一方面做饲养细胞，另一方面巨噬细胞可以吞噬死0亡的细胞和细胞碎片，为融合细胞的生长造成良好的环境。腹腔细胞的数目应适宜，过少则不能提供杂交瘤细胞所需要的生长因子，辣根过氧化物酶，过多会阻碍杂交瘤细胞的贴壁，一般以铺满孔底30%为好。使用方法1.用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度（按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制）。备注：推荐使用的抗原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。2.用振荡器充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量（按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl）与抗原按体积比1:1混合，并用振荡器剧烈振荡5-10min，直至静止放置10min水油相不分层。备注：与抗原混合前佐剂分层属正常现象，但必须充分混匀后才能取用。3.通过皮下或肌肉单点***免0疫动物，小鼠每针次100μl，家兔每针次200μl。（1）佐剂与抗原混合后应尽快***，若放置时间较长出现水油相分层，则必须按上述步骤2重新振荡混匀；（2）抽入针管前应摇匀，抽入针管后应尽快***；（3）尽量选择引流淋巴0结附近（如腋窝和腹0股0沟附近）的皮下或肌肉进行免0疫。杂交瘤分泌McAb的稳定性杂交瘤细胞体外连续传代培养了3个月，培养上清经ELISA检测能持续分泌抗AFP—McAb，杂交细胞经液氮冻存一年后细胞复苏培***长良好，仍能保持分泌抗AFP—McAb的能力。杂交瘤细胞染色体计数杂交瘤细胞染色体总数为96～104条，SP2／0骨0髓瘤细胞染色体总数为65条，Balb／c小鼠脾细胞染色体总数为40条，符合杂交瘤特征。辣根过氧化物酶-苏州博特龙(图)由苏州博特龙技术有限公司提供。苏州博特龙技术有限公司为客户提供“二抗,HRP,Biotin,FITC,AU,PE”等业务，公司拥有“博奥龙/BiodragonAbBox”等品牌，专注于生物制品等行业。，在江苏省苏州市相城开发区观塘路1号西交大漕湖科技园C幢810的名声不错。欢迎来电垂询，联系人：刘总。)