软gu细胞培养(1)豚鼠脱颈处死，备皮，用75%酒精消毒背部及四肢皮肤。(2)无菌操作下取下双侧股骨头及膝关节(保留周围肌肉，软gu不能暴露)，75%酒精浸泡5分钟，转移至PBS缓冲液中，带入超净工作台，细胞实验外包费用，剔除关节周围附着的软***，打开髋、膝关节，用尖刀削取关节软gu***，置入装有PBS缓冲液的无菌培养皿，防止软gu***被风干。(3)PBS缓冲液充分漂洗软gu小块3次，然后用小剪刀将软gu块切碎至约Imm3大小。(4)再次用PBS缓冲液冲洗3次，滤干，将细小的软gu块置入放有0.2%的II型胶原酶3ml的广口瓶里，摇匀后置于37°C恒温震荡箱中消化，40分钟后将上层消化液转移至15ml规格离心管中，800r/min离心5min，收集细胞(沉淀物)，加入含10%的胎牛xue清DMEM培养液4ml并吹打混匀，制成软gu细胞混悬液。(5)把消化所得的软gu细胞混悬液收集于离心管中，经滤网过滤后用细胞计数板计数，并把细胞混悬液密度调整为2x105/ml接种于25cm2规格的培养瓶中。将培养瓶放置于CO2培养箱内。培养条件为37°C、5%CO2。(6)未消化完的软gu小块继续用II型胶原酶如_上法消化，直至软gu块基本消失。(7)每日在倒置显微镜下观察软gu细胞生长情况并拍照保存。关于细胞培养的常见问题Q：培养液到底要不要加双抗（青&链）？A：双抗不是细胞生长必需的。我们培养细胞时不常规使用，因为连续使用会促进耐药性细胞株的产生，导致轻度污染持续存在。一旦将从培养液中去除，这种轻度污染终将发展成为大规模污染。具体情况，可根据自己实验室的环境，自行决定是否使用双抗。Q：细胞培养，能更换成其它种类的培养基吗？A：我们强烈建议好使用细胞提供机构或细胞库推荐的生长培养液。有些细胞可能会适应在不同培养基中生长，在做好保种的条件下，可以分出部分细胞做测试。Q:中的沉淀物对细胞培养有什么影响？A:（1）细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它生产商也证明了这一点。（2）过滤，如果中出现大量的沉淀物，将很难过滤。一般说来，陕西细胞实验，因为在生产工序中已经过100nm或者40nm的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不推荐再过滤用于细胞培养的。在实验室中没有必要再过滤处理，在大规模的细胞培养中往往将直接加到培养基中一起过滤。（3）污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起。研究者可能会在中观察到一些絮状的沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状沉淀，因此就断定被污染了。并且当研究者将样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可以运动的小黑点，细胞实验外包哪家好，因此就更加确认是被污染了。于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商确认，但终确定没有被污染而只是沉淀。为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将加到琼脂板上进行培养以观察是否有***生长。另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。南京英瀚斯(图)-细胞实验外包哪家好-陕西细胞实验由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司位于江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学***大学科技园科创楼A301。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前英瀚斯在技术合作中享有良好的声誉。英瀚斯取得全网商盟认证，标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。英瀚斯全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。)