企业视频展播，请点击播放视频作者：武汉博欧特生物科技有限公司空白片1.原因：比较多，***可能是一抗加错了，或者稀释时没取到亦或原管***没有混匀，再有可能二抗种属加错了，例如常见是兔的加成鼠的；转膜电压电流时间等；2.优化：仔细检查***是否加错，核实转膜设置没有问题；3.解析：胶片上一点信号都没有，多数情况是***加错了；如果中间出现了微弱的条带，可能原因是蛋白上样量太少，一抗浓度过低，ECL发光液稀释过高或失效。若转膜出现了失误，比如膜放反了，肯定白片。条带中间出现白斑点1.原因：底物消耗过快，中间区底物消耗完不发光了；2.优化：降低蛋白量，降低一抗和二抗的浓度；3.解析：快速操作，在中间部位底物消耗之前就把胶光片定影出来，一般实验员很难把控制；首0选从降低蛋白量，降低一抗二抗浓度入手。出现黑点1.原因：膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合；2.优化：封闭用的牛奶一定要纯并且完全溶解，封闭后至少洗膜一次；3.解析：确定封闭牛奶完全溶解，否则封闭时会导致不溶性颗粒附着在膜上，在发光时膜上会出现黑点；建议在牛奶溶解之后静止三分钟，轻取上层牛奶液进行封闭，封闭结束常规洗膜一次；孵育一抗或二抗时，需要加牛奶的也请参照此操作。条带拖尾1.原因：蛋白量太大，一抗浓度偏高和孵育时间太长；2.优化：根据实验需求调整上样蛋白量，调整一抗浓度和时间；3.解析：这种情况也是常见问题，上样蛋白量一般会做预实验避免；还有容易发生的是一抗浓度太高，作用时间太长引起的，隐球菌***，品牌一抗都有稀释比例建议；再个质量好的一抗直接37度孵育半小时就好，无需孵育过夜；再强调一遍洗膜千万不要偷懒，次数和时间洗到位，不要担心把***和蛋白洗掉没那么脆弱。隐球菌***-biorbyt(在线咨询)由武汉博欧特生物科技有限公司提供。行路致远，砥砺前行。武汉博欧特生物科技有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴，更矢志成为其它具有竞争力的企业，与您一起飞跃，共同成功!)