MilliporeImmobilon-Ny带正电尼龙转印膜INYC00010
价格:4031.00
概述Millipore提供了一种用于核酸应用转印膜选择。使用带正电的Immobilon-Ny+转印膜可以在Southernblotting,Northernblotting和colony/plaquelifts实验中获得出色的结果。Immobilon-NC硝酸纤维素转印膜,是主要的Southern和colony/plaque实验方案中***初使用的膜,也可作为一种灵敏度较低但更经济的选择。Immobilon-Ny+带正电尼龙转印膜Immobilon-Ny+是一种带正电的尼龙转印膜,非常适合于可靠与可重现的转移、固定、杂交及随后的重复杂交实验。其表面均一分布的正电荷密度确保得到的灵敏度和***低的背景信号。此膜经强化处理具有超长的耐久性,这一点对于重复杂交试验至关重要。可提供详细的实验方案,在使用Immobilon-Ny+转印膜时可用于优化转印结果。灵敏度,而背景信号***小非常出色的重复杂交特性在化学发光法和***性检测系统中均表现出色性能SouthernBlotting直接比较三种带正电尼龙膜在各自优化实验方案下的表现:每种膜在其推荐的紫外波长照射下交联。Immobilon-Ny+转印膜的杂交信号是其它两种膜的2倍。12次重复杂交之后的信号强度尼龙膜在254nm交联,并进行了多次重复杂交,依次为:用32P标记探针做2次杂交,4次模拟杂交,用32P标记探针做第7次杂交,然后进行5次模拟杂交以及用32P标记探针做第13次杂交。在每个杂交周期之间,将膜置于0.4MNaOH溶液中,在45°C下洗提30分钟。模拟杂交与真实杂交完全一样,区别在于未加32P标记探针。在整个重复杂交过程中,Immobilon-Ny+的信号强度是竞争产品A和B的两倍。检测灵敏度将凝胶上DNA的量减少到0.01ng。0.1lane(条带)中的2.2和2.0kbp带分别与DNA的0.48和0.42pg相对应。大约相当于10µg人类***组DNA中一个单拷贝***序列。可通过对探针浓度加倍来提高灵敏度。在0.01ng条带中,与竞争产品A相比,Immobilon-Ny+转印膜灵敏度稍高,而背景信号更低。用化学发光检测进行NorthernBlotting鼠肝的全部RNA(1µg)在甲醛琼脂糖凝胶中电泳分离,然后通过毛细作用转印到Immobilon-Ny+转印膜和竞争产品带正电尼龙膜“A”。与烘焙相比,通过紫***联固定RNA能增强信号。Immobilon-Ny+转印膜比竞争产品A表现出更高的灵敏度。ColonyLifts将载有pUC19或pLH2(2.0kbpλ噬菌体DNAHindIII片段***至pUC19)的JM109混合***悬浮液置于琼脂培养皿中,在37°C下培养过夜。将培养皿在4°C下冷却30分钟,将菌落(直径大约1–2mm)转印至一片82mm直径的Immobilon-Ny+圆片膜上,或转印至竞争产品带正电的尼龙膜上。膜上的DNA在254nm,60,000µJoules/cm2紫外光照射下交联。然后用a32P标记的DNA探针对膜进行杂交,并使用磷屏成像系统显色。Immobilon-NC转印膜Immobilon-NC转印膜是一种经济型选择,用于核酸和蛋白质印迹实验方案。这种***转印膜,是Southern、colony/plaque以及蛋白质实验方案中***初使用的膜。NCHATF所含的混合纤维素酯基质,不含在细胞生长过程中会干扰细胞壁完整性的表面活性剂。这些膜用于colonylifts。NCHAHY所含的混合纤维素酯基质,所带的表面活性剂能够增强可湿性以及转印过程中的处理能力。两种膜对核酸和蛋白质都具有高吸附容量。适用于常规转印。)