逆转录病毒包装-友名生物公司
腺病毒的***组腺病毒的***组以线性的双链DNA形式存在,由蛋白VII和一种称为mu的小蛋白紧密地环绕在其周围,起到类组蛋白样的作用。另一种蛋白V将这种DNA-蛋白复合物连接起来,并通过蛋白VI与病毒衣壳连接在一起。在两条链的5′端各以共价键结合着一个被称为DNA末端蛋白(pTP)复合物(DNA-TPC)的特化的结构,与腺病毒copy密切相关。腺病毒***组的两端各有一段100bp的反向末端重复序列(ITR),是copy的起始位点。在左端ITR的3′侧有一段长约300bp的包装信号(ψ)介导腺病毒***组包装入病毒衣壳。对腺病毒而言,只有包括两端的ITR和包装信号(ψ)的约0.5kb的序列是顺式作用元件,也就是说必须由腺病毒载体自身携带,而其他的30余种蛋白都可以通过辅助病毒(或细胞)反式补足。***导入细胞常用方法不同的载体在不同的宿主细胞中繁殖,导入细胞的方法也不相同。由于外源DNA的进入而使细胞遗传性改变称为转化,早在1943年,***ery等就发现***肺1炎双球菌的DNA与***肺1炎双球菌共培养后产生***性的肺1炎双球菌后代的转化现象。但DNA进入细胞的效率很低,在分子生物学和***工程工作中可采取一些方法处理细胞,经处理后的细胞就容易接受外界DNA,称为感受态细胞,再与外源DNA接触,就能提高转化效率。例如大肠杆1菌经冰冷C***2的处理,就成为感受态***,当加入重组质粒并突然由4℃转入42℃作短时间处理,质粒DNA就能进入***;用高电压脉冲短暂作用于***也能显著提高转化效率,这称为电穿孔(electroporation)转化法***导入细胞常用方法转染重组的噬菌体DNA也可象质粒DNA的方式进入宿主菌,即宿主菌先经过C***2,电穿孔等处理成感受态***再接受DNA,进入感受态***的噬菌体DNA可以同样copy和繁殖,这种方式称为转染(transfection)。M13噬菌体DNA导入大肠杆1菌就常用转染的方法。重组DNA进入宿主细胞也常用转染方式。***经典的是1973年建立的磷酸钙法,其利用的基本现象是:DNA如以磷酸钙-DNA共沉淀物形式出现时,逆转录病毒包装,培养细胞摄取DNA的效率会显著提高。用电穿孔法处理培养的哺乳类细胞也能提高细胞摄取DNA能力,但所用外加电场的强度、电脉冲的长度等条件与处理***者都很不相同。用人工脂质膜包裹DNA,形成的脂质体可以通过与细胞膜融合而将DNA导入细胞,方法简单而有效,但缺点是有细胞毒性和血1清的不亲和性,近年来人们发现了一种更为有效的转染***-阳离子聚合物,其克服了脂质体转染***细胞毒性大,在体内易被血1清清除等缺点,具有转染效率1高,操作简单而日益受到重视。逆转录病毒包装-友名生物公司由武汉友名生物技术有限公司提供。“商务服务”选择武汉友名生物技术有限公司,公司位于:湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701,多年来,友名生物坚持为客户提供好的服务,联系人:董先生。欢迎广大新老客户来电,来函,亲临指导,洽谈业务。友名生物期待成为您的长期合作伙伴!)