蛋白质含量测定方法之双缩脲法（biuret法）实验原理双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：***铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分准确的蛋白质测定。蛋白质测定***（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血1清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，无细胞表达系统，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血1清清蛋白用H2O或0.9%N***配制，酪蛋白用0．05NaOH配制。（2）双缩脲***：称以1.50克***铜（CuSO4?5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNa***H4O6?4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10%NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此***可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。蛋白表达系统分类及优劣分析原核蛋白表达系统既是***常用的表达系统，也是经济实惠的蛋白表达系统。原核蛋白表达系统以大肠杆1菌表达系统为代表，具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点，缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制，如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠，得到具有生物活性的蛋白的几率较小。酵母蛋白表达系统以甲1醇毕赤酵母为代表，具有表达量高，可诱导，糖基化机制接近高等真核生物，分泌蛋白易纯化，易实现高密发酵等优点。缺点为部分蛋白产物易降解，表达量不可控。哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统主要优点是蛋白翻译后加工机制比较接近体内的天然形式，相对容易保留生物活性，缺点是表达量通常较低，稳定细胞系建立技术难度大，生产成本高。无细胞表达系统-武汉友名生物由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司在其它这一领域倾注了诸多的热忱和热情，友名生物一直以客户为中心、为客户创造价值的理念、以品质、服务来赢得市场，衷心希望能与社会各界合作，共创成功，共创辉煌。相关业务欢迎垂询，联系人：董先生。)