巢式PCR(NESTPCR枝术.先用一对靶序列的外引物扩增以提高模板量.然后再用一对内引物扩增以得到特异的PCR带。此为巢式PCR。若用一条外引物作内引物则称之为半巢式PCR。为减少巢式PCR的操作步骤可将外引物设计得比内引物长些，且用量较少。同时在第yi次PCR时采用较高的退火温度而第二次采用较低的退火温度。这样在第yi次PCR时，由于较高退火温度下内引物不能与模板结合，故只有外引物扩增产物，经过若干次循环。待外引物基本消耗尽，无需取出第yi次PCR产物，只需降低退火即可直接进行PCR扩增。这不仅减少操作步骤。同时也降低了交叉污染的机会。这种PCR称中途进退式PCR(drop-in，RNA扩增***盒，drop-outPCR)上述三种方法主要用于少量DNA模板的扩增。PCR技术的基本原理PCR技术是在模板DNA、引物和四种dNTP等存在的条件下.依赖于DNA聚合酶(Taq酶)的酶.促合成反应。其具体反应分三步:变性、退火、聚合。以上三步为一个循环，每一循环的产物DNA又可以作为下一个循环模板，数小时后，介于两个引物之间的目的DNA得到了大量的copy，经25~30次循环DNA数量可达2x1067拷贝数。锚定PCR(AnchoredPCR.APCR技术.用酶法在一通用引物反转录cDNA3-末端加上一段已知序列，然后以此序列为引物结合位点对该cDNA进行扩增，称为APCR.应用:它可用于扩增未知或全知序列，如未知cDNA的制备及低丰度cDNA文库的构建。PCR法不仅仅局限于分子生物学，还因其简便、迅速等特点被广泛应用于***、法***、食品、环境卫生检验、动植物检验等其它领域。TaqDNA聚合酶是PCR法普遍使用的聚合酶，但其具有如下局限性。1.可信度(Fidelity)：通常TaqDNAPolymerase的Fidelity并不高，PCR反应有时会出现错配(Misincorporation)现象，因而PCR克1隆、变异导入等实验中，需加以注意。2.扩增的DNA长度：使用TaqDNAPolymerase进行PCR扩增时，通常可扩增几kb的DNA，超过10kb则比较困难。这就给利用PCR进行Mapping等Genome解析带来麻烦。3.扩增量：使用TaqDNAPolymerase进行PCR产物克1隆及食品、环境卫生检验等时，扩增量常常达不到要求。为解决以上难题，Takara在对Polymerase、Buffer及反应条件等进行深入研究的基础上，开发了LAPCR(LongandAccuratePCR)技术，运用此技术可大量正确地扩增长达40kb的DNA部分片段。LAPCR技术扩展了PCR的应用范围，可在Genome解析、***诊断、长片段DNA的克1隆及变异导入等方面发挥优势。RNA扩增***盒-友名生物技术(图)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司为客户提供“商务服务”等业务，公司拥有“友名生物”等品牌，专注于其它等行业。，在湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701的名声不错。欢迎来电垂询，联系人：董先生。)