PCR的创建Khorana(1971)等***早提出核酸体外扩增的设想：“经DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可合成tRNA***。”但由于当时***序列分析方法尚未成熟，热稳定DNA聚合酶尚未报道以及引物合成的困难，这种想法似乎没有实际意义。加上分子克1隆技术的出现提供了一种克1隆和扩增***的途径，所以Khorana的设想被人们遗忘了。1983年4月的一个星期五晚上，他开车去乡下别墅的路上，猛然闪现出“多聚酶链式反应”的想法。1983年12月，Mullis用同位素标记法看到了10个循环后的49bp长度的第yi个PCR片段；1985年，KaryMullis在Cetus公司工作期间，发明了PCR。Mullis要合成DNA引物来进行测序工作，却常为没有足够多的模板DNA而烦恼。1985年10月25日申请了PCR的专1利，1987年7月28日批准（专1利号4，683，202），Taq酶，Mullis是第yi个发明人；1985年12月20日在Science杂志上发表了第yi篇PCR的学术论1文，Mullis是共同作者；1986年5月，Mullis在冷泉港实验室做专题报告，全世界从此开始学习PCR的方法。差示PCR(differentialPCR，d-PCR)技术d-PCR可以定量检测标本靶***的拷贝数。它是将目的***和一个单拷贝的参照***置于一个试管中进行PCR扩增。电泳分离后呈两条区带，比较两条区带的丰度，或在引物5°-端标记上放1射性核素后.通过检测两条区带放1射性强度即可测出目的***的拷贝数。定量PCR(quantitativePCR，qPCR)技术qPCR技术是用合成的RNA作为内标来检测PCR扩增目的mRNA的量，涉及目的mRNA和内标用相同的引物共同扩增.但扩增出不同大小片段的产物.可容易地电泳分离。一种内标可用于定量多种不同目的mRNA。qPCR可用于研究***表达。能提供特定DNA***表达水平的变化.在***1症、代谢紊乱及自身免1疫性***的诊断和分析中很有价值。出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个***组或大片段的交叉污染，导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决：操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样内或溅出离心管外。除酶及不能耐高温的物质外，所有***或器材均应高压消毒。所用离心管及样进头等均应一次性使用。必要时，在加标本前，反应管和***用紫外线照射，以***存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染，这些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，与引物互补后，可扩增出PCR产物，而导致假阳性的产生，可用巢式PCR方法来减轻或消除。Taq酶-友名生物公司由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司是一家从事“商务服务”的公司。自成立以来，我们坚持以“诚信为本，稳健经营”的方针，勇于参与市场的良性竞争，使“友名生物”品牌拥有良好口碑。我们坚持“服务至上，用户至上”的原则，使友名生物在其它中赢得了客户的信任，树立了良好的企业形象。特别说明：本信息的图片和资料仅供参考，欢迎联系我们索取准确的资料，谢谢！)