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用乙醇沉淀DNA时为什么一定要加NaAc或N***在pH为8左右的溶液中,DNA分子是带负电荷的,加一定浓度的NaAc或N***,使Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀,当加入的盐溶液浓度太低时,只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合,这样就造成DNA沉淀不完全,当加入的盐溶液浓度太高时,其效果也不好。在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响DNA的酶切等反应,必须要进行洗涤或重沉淀。加核糖核酸酶降解核糖核酸后,为什么再要用SDS与KAc来处理?加进去的RNase本身是一种蛋白质,为了纯化DNA,又必须去除之,加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀,再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物,使沉淀更加完全。也可用饱和酚、*抽提再沉淀,去除RNase。在溶液中,有人以KAc代替NaAc,也可以收到较好效果。在***操作实验中,磷酸盐缓冲系统(pKa=7.2)和硼酸系统(pKa=9.24)等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH),可作DNA的保存液,但在转化实验时,磷酸根离子的种类及数量将与Ca2+产生Ca3(PO4)2沉淀,在DNA反应时,不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同,有的要求高离子浓度,有的则要求低盐浓度,采用Tris-HCl(pKa=8.0)的缓冲系统,由于缓冲液是TrisH+/Tris,不存在金属离子的干扰作用,故在提取或保存DNA时,大都采用Tris-HCl系统,而TE缓冲液中的EDTA更能稳定。植物DNA的“一管法”提取方法:1称取100mg新鲜植物***,剪碎置于15ml离心管中,可加入少许无菌石英砂,支原体检测,加入3滴提取缓冲液,用带玻璃钻头的电钻充分研磨匀浆。2加入400μl提取缓冲液,混匀后置于90℃水浴中,不时颠倒摇匀。3温育20min后,置于冰浴中5min,使***和聚乙烯聚吡咯烷酮(polyvinylpolypyrrolidone,PVPP)沉淀,置于4℃下保存备用。传统小分子特异性antibody制备技术为解决小分子这类半抗原物质无法刺激宿主动物产生antibody的特性,必须将半抗原回复完全抗原的特性。解决这个问题可以通过将小分子和对宿主动物immune原性很强的物质:如OVA、BSA、KLH等偶联,将其制备成完全抗原,通过immune宿主动物,便能促使宿主动物产生针对小分子的特异性antibody,这类antibody通过抗原特异性的筛选便能获取目的antibody。目前,通过此项技术能解决绝大多数小分子特异性antibody的制备,但是也可能由于小分子的结构特异,偶联物和偶联方式的选取、偶联率的差异以及immune技术有待发展等多方面的因素使其特异性antibody的制备存在困难。支原体检测-友名生物公司由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司实力不俗,信誉可靠,在湖北武汉的其它等行业积累了大批忠诚的客户。友名生物带着精益求精的工作态度和不断的完善创新理念和您携手步入辉煌,共创美好未来!)
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