逆转录病毒包装-友名生物公司
***导入细胞常用方法转染重组的噬菌体DNA也可象质粒DNA的方式进入宿主菌,即宿主菌先经过C***2,电穿孔等处理成感受态***再接受DNA,进入感受态***的噬菌体DNA可以同样copy和繁殖,这种方式称为转染(transfection)。M13噬菌体DNA导入大肠杆1菌就常用转染的方法。重组DNA进入宿主细胞也常用转染方式。***经典的是1973年建立的磷酸钙法,其利用的基本现象是:DNA如以磷酸钙-DNA共沉淀物形式出现时,逆转录病毒包装,培养细胞摄取DNA的效率会显著提高。用电穿孔法处理培养的哺乳类细胞也能提高细胞摄取DNA能力,但所用外加电场的强度、电脉冲的长度等条件与处理***者都很不相同。用人工脂质膜包裹DNA,形成的脂质体可以通过与细胞膜融合而将DNA导入细胞,方法简单而有效,但缺点是有细胞毒性和血1清的不亲和性,近年来人们发现了一种更为有效的转染***-阳离子聚合物,其克服了脂质体转染***细胞毒性大,在体内易被血1清清除等缺点,具有转染效率1高,操作简单而日益受到重视。脂质体法是用带正电荷的脂质体作载体携带外源***,与带负电荷的细胞膜融合,把外源***导入细胞。用脂质体法转化原生质体,其毒性较电1击法和PEG法小,且适于运输大分子DNA穿过质膜。Antonelli等(1990)用该法将***组DNA转入BMS玉米原生质体,获得转化了的再生愈伤***,转化率高达8%。脂质体法的优点是转化受体为单个细胞,易于筛选,不易形成嵌合体,对于原生质体再生能力好的植物品种,是非常好的转化方法。电1击法电1击法基本原理是电脉冲使细胞膜产生可逆性的“微孔”,外源DNA可通过这些微孔进入受体细胞原生质体内。1985年Fromm等用electricshock法将pat***导入了玉米原生质体,得到了该***稳定表达的愈伤***。随着玉米原生质体再生技术的研究取得进展,1988年Rhodes等用electricshock法转化玉米原生质体,初步获得了完整的转0***植株。electricshock法还可以对幼胚、愈伤***和胚性悬浮细胞系进行遗传转化。1992年D’HallumK等以玉米幼胚和愈伤***为受体,用electricshock法导入neo***,获得了可育的转0***植株,并且neo***能稳定地遗传给后代。1993年Sukhapinda等用electricshock法转化从玉米花粉愈伤***分离的原生质体,将gusA和nptⅡ转入原生质体,获得单倍体转化植株。1994年Laursen等以果胶降解酶处理悬浮细胞系后,通过electricshock法导入bar***,也获得了可育的转0***玉米。电1击法操作简单,不受宿主限制,在遗传转化技术研究的初期得到了较为广泛的应用,但是它的转化效率较低,而且对有壁细胞或***的转化效果较差。逆转录病毒包装-友名生物公司由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司是从事“商务服务”的企业,公司秉承“诚信经营,用心服务”的理念,为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询!联系人:董先生。)
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