mRNA切割酶-友名生物公司
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲1基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成:一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列;另一种为***的甲1基化酶,它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克1隆中得到了广泛应用,它们是重组DNA的基础。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5-G↓AATTC-3),有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中,有的在对称轴处切割,产生平末端的DNA部分片段(如***aⅠ:5-CCC↓GGG-3);有的切割位点在对称轴一侧,产生带有单链突出末端的DNA部分片段称粘性末端,mRNA切割酶,如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。限制性内切酶的质量控制鉴定限制性内切酶的一个活性单位是指,在50μl的反应体系里,采用随酶提供的NEBuffer,用1个小时的时间,消化1μg底物DNA所需要的酶量。酶切反应应在带盖的eppendorf管中进行,选用技术数据卡上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前,浓缩的酶应该用推荐的贮存液稀释成大约1,000单位/ml。质量控制所有质量控制鉴定结果都公布在随酶提供的技术数据卡上。DNA限制性内切酶酶切影响条件:DNA纯度、缓冲液、温度条件及限制性内切酶本身都会影响限制性内切酶的活性。大部分限制性内切酶不受RNA或单链DNA的影响。处理方法:当微量的污染物进入限制性内切酶贮存液中时,会影响其进一步使用,因此在吸取限制性内切酶时,每次都要用新的吸管头。如果采用两种限制性内切酶,必须要注意分别提供各自的***适盐浓度。若两者可用同一缓冲液,则可同时水解。若需要不同的盐浓度,则低盐浓度的限制性内切酶必须首先使用,随后调节盐浓度,再用高盐浓度的限制性内切酶水解。也可在第yi个酶切反应完成后,用等体积酚/氯1仿抽提,加0.1倍体积3mol/LNaAc和2倍体积无水乙醇,混匀后置-70℃低温冰箱30分钟,离心、干燥并重新溶于缓冲液后进行第二个酶切反应。mRNA切割酶-友名生物公司由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司是一家从事“商务服务”的公司。自成立以来,我们坚持以“诚信为本,稳健经营”的方针,勇于参与市场的良性竞争,使“友名生物”品牌拥有良好口碑。我们坚持“服务至上,用户至上”的原则,使友名生物在其它中赢得了客户的信任,树立了良好的企业形象。特别说明:本信息的图片和资料仅供参考,欢迎联系我们索取准确的资料,谢谢!)
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