核酸纯化-友名生物公司
棉花等酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法:1取2g新鲜幼嫩的叶片放入研钵中,加入液氮后快速、充分研磨,待成极细的粉末状时迅速转入到50ml离心管中。2在50ml离心管中加入10ml冰预冷的提取缓冲液,在涡悬振荡器上充分混匀。3于4℃,2700×g离心20分钟,倒去上清液。4在沉淀中加入5ml裂解缓冲液,在涡旋振荡器上充分混匀。5于65℃水浴锅中温育30min。6加入5ml氯1仿/异戊1醇(24/1),并上下翻转以充分混合。7于4℃,2700×g离心5分钟。8转移上层水相至一新的50ml离心管中。9重复步骤7-9一次。10加入2/3体积的冰预冷的异丙1醇,并上下翻转以充分混合,至-20℃2h。11于4℃,1200×g离心10min。12在一新管中加入20ml含80%乙醇15mmol/LNaAc溶液,用玻棒将DNA转入该管(如不能直接用玻棒缠出,可离心后倒出上清,再在其中加入20ml含80%乙醇15mmol/LNaAc溶液),放置20min后稍许离心,移走上清并吸出残存乙醇,室温干燥。13加入10mlTE(10mmol/LTris-HClPH=80,1mmol/LEDTA)并加入终浓度为20(g/L的RNaseA,过夜。14风干,用50μlTE缓冲液溶解,存于-20℃备用。与DNA不同,RNA一般为单链长分子,不形成双螺旋结构,但是很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。RNA的碱基配对规则基本和DNA相同,不过除了A-U、G-C配对外,G-U也可以配对。在细胞中,根据结构功能的不同,RNA主要分三类,即tRNA(转运RNA),rRNA(核糖体RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白质的模板,核酸纯化,内容按照细胞核中的DNA所转录;tRNA是mRNA上碱基序列(即遗传密码子)的识别者和氨基酸的转运者;rRNA是组成核糖体的组分,是蛋白质合成的工作场所。PCR产物的回收(胶回收***盒)1.胶回收的目的(1)去除非特异性扩增的产物(2)去除多余的底物(3)去除多余的Taq酶(4)得到目的片段2.胶回收的过程(1)切胶:紫外下切胶,称重。之后用头将胶块捣碎。切胶的刀片建议选用一次性刀片,实验台等也尽可能用乙醇擦拭干净。可通过空EP管与装胶EP管质量的差值计算胶的质量。注意切胶时尽可能避免切到条带外的凝胶,且避免紫外时间过长。别忘记胶条有厚度,前后多余的部分也尽量切除。(2)溶胶:每1mg胶加入1μL膜结合液(MB),按比例1:1加入MB,55℃水浴溶解。每1~2min震荡混匀,待溶解后至少在水浴中保持1~2min,保证胶块完全溶解。在电泳过程中,DNA会与大分子的多糖紧密结合,凝胶的种类和质量不同,DNA与之结合力也不同,只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放。否则,凝胶将与DNA一起沉淀下来,洗脱后将影响回收结果的纯度。(3)结合:将溶胶转移至纯化柱内,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将纯化柱重新插回收集管中。胶块完全溶解后建议将胶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在温度较高时结合DNA的能力较弱。核酸纯化-友名生物公司由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司拥有很好的服务与产品,不断地受到新老用户及业内人士的肯定和信任。我们公司是商盟认证会员,点击页面的商盟***图标,可以直接与我们***人员对话,愿我们今后的合作愉快!)
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