腺病毒载体-武汉友名生物公司(图)
科学家在培养转0***植物时,常用什么中的质粒作为载体?(1)具有较小的分子量。经验表明,为了避免在DNA的纯化过程中发生链的断裂,克1隆载体的分子大小建议不要超过10Kb。pBR质粒这种小分子量的特点,不仅易于自身DNA的纯化,而且可容纳较大的外源DNA部分片段;(2)具有两种抗1菌素抗性***可供作转化子的选择记号,能指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞以及外源DNA分子是否插入载体分子形成了重组子。标记***往往可以赋予宿主细胞一种新的表型,这种转化细胞可明显地区别于非转化细胞。当我们把一个DNA部分片段插入到某一个标记***内时,该***就失去了相应的功能。当把这种重组DNA分子转到宿主细胞后,该***原来赋予的表型也就消失了。要是仍保留了原来表型的转化细胞,细胞内含有的DNA分子一定不是重组子。很显然,既要指示外源DNA是否进入了宿主细胞,又要指示载体DNA分子中是否插入了外源DNA部分片段,那么这种载体必须至少具有两个标记***。另外,pBR质粒载体还具较高的拷贝数,而且经过氯霉1素扩增之后,每个细胞中可积累1000~3000个拷贝,这就为重组体DNA的制备提供了极大的方便。腺病毒载体的构建经历了体外直接连接、包装细胞内重组、***内重组、位点特异性重组4个发展阶段,同时随着分子生物学技术的发展,改进的体外连接法又得到应用。体外连接法。这种方法需要全长腺病毒***组和一个含腺病毒***组左末端序列的质粒,包括左端反向末端重复(Invertedterminalrepeat,ITR)、包装信号和E1A的增强子序列。将目的***克1隆到质粒的病毒序列下游,ClaI酶切获得含目的***的***组左末端,连接到ClaI酶解的野1生型腺病毒***组(ClaI在病毒***组仅有一个酶切位点,位于E1A***内部),将得到的含目的***的的***组DNA直接转染包装细胞293,产生重组病毒颗粒。这种方法需要培养野1生型腺病毒以提取病毒***组,能够使用的酶切位点仅有一个,连接效率低,而且仅删除了部分E1A***,外源***载量有限,所以现已淘汰不用。启动子:RNA聚合酶特异性识别结合和启动转录的DNA序列。有方向性,位于转录起始位点上游。上游启动子元件:TATA盒上游的一些特定DNA序列,反式作用因子可与这些元件结合,调控***的转录效率。反应元件:与被的信息分子受体结合,并能调控***表达的特异DNA序列。增强子:与反式作用因子结合,腺病毒载体,增强转录活性,在***任意位置都有效,无方向性。沉默子:***表达负调控元件,与反式作用因子结合,***转录活性。Poly(A)加尾信号:结构***末端保守的AAUAAA顺序及下游GT或T富含区,被多聚腺苷酸化特异因子识别,在mRNA3′端加约200个A。(2)反式作用因子:能识别和结合特定的顺式作用元件,并影响***转录的一类蛋白质或RNA。腺病毒载体-武汉友名生物公司(图)由武汉友名生物技术有限公司提供。行路致远,砥砺前行。武汉友名生物技术有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴,更矢志成为其它具有竞争力的企业,与您一起飞跃,共同成功!)
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