RNA上样Buffer-武汉友名生物
植物DNA的CTAB提取法:1称取新鲜叶片2-3g,剪碎放入研钵中,在液氮中研磨成粉末。2将粉末转移到的加有7ml经预热的15×CTAB提取缓冲液15ml离心管中,迅速混匀后置于65℃水浴中,温育30min。3取出离心管,冷却至室温,加入氯1仿/异戊1醇(24:1),充分混匀,室温下2300×g离心20min。4将上清转移至另一新的15ml离心管中,加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯1仿/异戊1醇。充分混匀,2300×g离心20min。5转移上清至另一新的15ml离心管中,加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液,轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。1000×g离心10min,使DNA沉淀于管底。6加入15-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中过夜。待DNA完全溶解后,加2-3ml4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀,挑出DNA,置于15ml离心管中,用70%乙醇清洗30min,用离心机甩5s,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5min,倒出95%乙醇,在超净工作台上吹干。7将风干的DNA直接在4℃保存备用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存。适用于PCR研究的快速提取法:1田间剪取植株新鲜叶片5-10mg(约2cm长)左右,新鲜叶片放于15ml离心管中,存于冰盒中,根据样品号贴上相应的标签。2用剪刀将叶片***剪细(约05cm长)放在点穴式研板中。3加入400μlDNA提取缓冲液,用玻棒将叶***研细,直到液体变成深绿色即可。4再加400μlDNA提取缓冲液,混合均匀,转入一新的15ml离心管(贴上相应的编号)。5加400μl氯1仿,混合均匀后,2400×g离心30s,将上清液转入一支新的15ml离心管(贴上相应的编号)。6加800μl无水乙醇,混匀,RNA上样Buffer,2400×g离心3min。弃上清。770%乙醇冲洗,风干。8用50μlTE缓冲液溶解,存于-20℃。9取1μl用于PCR分析。PCR产物的回收(胶回收***盒)1.胶回收的目的(1)去除非特异性扩增的产物(2)去除多余的底物(3)去除多余的Taq酶(4)得到目的片段2.胶回收的过程(1)切胶:紫外下切胶,称重。之后用头将胶块捣碎。切胶的刀片建议选用一次性刀片,实验台等也尽可能用乙醇擦拭干净。可通过空EP管与装胶EP管质量的差值计算胶的质量。注意切胶时尽可能避免切到条带外的凝胶,且避免紫外时间过长。别忘记胶条有厚度,前后多余的部分也尽量切除。(2)溶胶:每1mg胶加入1μL膜结合液(MB),按比例1:1加入MB,55℃水浴溶解。每1~2min震荡混匀,待溶解后至少在水浴中保持1~2min,保证胶块完全溶解。在电泳过程中,DNA会与大分子的多糖紧密结合,凝胶的种类和质量不同,DNA与之结合力也不同,只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放。否则,凝胶将与DNA一起沉淀下来,洗脱后将影响回收结果的纯度。(3)结合:将溶胶转移至纯化柱内,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将纯化柱重新插回收集管中。胶块完全溶解后建议将胶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在温度较高时结合DNA的能力较弱。RNA上样Buffer-武汉友名生物由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司实力不俗,信誉可靠,在湖北武汉的其它等行业积累了大批忠诚的客户。友名生物带着精益求精的工作态度和不断的完善创新理念和您携手步入辉煌,共创美好未来!)