反转录预混液-友名生物技术(图)
PCR反应五要素参加PCR反应的物质主要有五种即引物(PCR引物为DNA部分片段,细胞内DNA复1制的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)。[PCR步骤]标准的PCR过程分为三步:1.DNA变性(90°C-96*C):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA2.退火(25C-65C):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。3.延伸(70°C-75*C):在Taq酶(在72C左右,活性***佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5端→3端延伸,合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍。现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是***佳也能在很短的时间内copy完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60°C-65C间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度。PCR循环参数预变性模板DNA完全变性与PCR酶的完全激1活对PCR能否成功至关重要,建议加热时间参考***说明书,一般未修饰的Taq酶激1活时间为两分钟。变性步骤:循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性,可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不,易造成扩增失败。引物退火:退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。引物延伸:引物延伸一般在72℃进行(Taq酶***适温度)。但在扩增长度较短且退火温度较高时,本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定,一般推荐在1000bp以上,含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。循环数:大多数PCR含25-35循环,过多易产生非特异扩增。***后延伸在***后一个循环后,反应在72℃维持10-30分钟.使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链。普通的PCR仪把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,叫传统的PCR仪,也叫普通PCR仪。它是由主机,加热模块,PCR管,热盖,控制软件组成。根据DNA部分片段高温解链,降温配对聚合原理,通过循环改变加热模块的温度,微量不易于分辨的的DNA部分片段进行扩增成大量的DNA部分片段,反转录预混液,从而对其进行分析鉴定。根据需要可结合电泳仪,水平电泳槽,一起应用。如果要做不同的退火温度需要多次运行。主要是做简单的,对目的***退火温度的扩增。该仪器主要应用于***临床检验,食品检测,科研机构,高等院校教学对遗传变异,***表达等进行研究。反转录预混液-友名生物技术(图)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司位于湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701。在市场经济的浪潮中拼博和发展,目前友名生物在其它中享有良好的声誉。友名生物取得全网商盟认证,标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。友名生物全体员工愿与各界有识之士共同发展,共创美好未来。)