DNA部分片段的连接DNA部分片段通过用每一种限制性内切酶过量消化底物DNA而获得。这些片段随后用T4DNA连接酶连接(5′末端浓度为0.1-1.0μM)。连接的片段然后用同一种限制性内切酶重切。仅当3′和5′末端都保留完整，连接反应才会发生;而且只有那些识别位点完全***的分子才能被重切。切割后正常的带型说明3′和5′末端都是完整的，而且准备的酶样品中检测不到核酸外切酶和磷酸酶。限制性酶切分析法限制性酶切分析法是指***组或一段核酸用限制性内切酶消化产生的片段经电泳等方法分离形成特别的条带图谱，对DNA序列的特征进行的分析。限制性酶是生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的***并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用。限制酶是***工程中所用的重要切割工具。科学家已从原核生物中分离出了许多种限制酶，并且已经商品化，在***工程中广泛使用。根据限制酶切割的特点，可将它们分为两大类：一类是切割部位无特异性的；另一类是可特异性地识别核苷酸序列，内切酶，即只能在一定的DNA序列上进行切割。限制酶作为酶类，诀定其催化作用具有高1效性、专一性和作用条件温和等特点。其中专一性的具体表现为:某种限制酶只能催化DNA上特定序列特***点的磷酸二脂键水解，结果是使DNA分子被分割成不同的DNA部分片段。限制酶所识别的双链DNA上的序列具有“回文对称”性质，即无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，中心轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，即错位平切，产生的是黏性末端;当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，即平切，产生平末端。错位切的限制酶在***工程中比较会常使用到，因为与平末端相比较，黏性末端更有利于DNA部分片段的连接。内切酶-友名生物(推荐商家)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司在其它这一领域倾注了诸多的热忱和热情，友名生物一直以客户为中心、为客户创造价值的理念、以品质、服务来赢得市场，衷心希望能与社会各界合作，共创成功，共创辉煌。相关业务欢迎垂询，联系人：董先生。)