PCR反应特异性强：PCR反应的特异性决定因素为：①引物与模板DNA特异正确的结合；②碱基配对原则；③TaqDNA聚合酶合成反应的忠实性；④靶***的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合（复性）可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶***片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶***区，其特异性程度就更高。PCR循环参数预变性模板DNA完全变性与PCR酶的完全激1活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考***说明书，一般未修饰的Taq酶激1活时间为两分钟。变性步骤：循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不，易造成扩增失败。引物退火：退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。引物延伸：引物延伸一般在72℃进行（Taq酶***适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。循环数：大多数PCR含25-35循环，过多易产生非特异扩增。***后延伸在***后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。突变：PCR克1隆的一大优点是能够通过克1隆将所需突变引入目的***中，以便进行突变研究。在定1点突变中，经过设计的PCR引物可将碱基置换、删除或插入整合到特定序列中。引物***到已克1隆至质粒中的序列上。随后，含有引入突变的PCR产物通过自我连接，重新生成环状质粒，RT-PCR***盒，并用于转化感受态细胞。测序：PCR是为测序富集模板DNA的一种相对简单的方法。为保证DNA序列准确性，强烈建议使用高保真PCR来制备测序模板。在Sanger测序中，PCR扩增片段经纯化并用于测序反应。使用常用的测序引物结合位点对PCR引物的5′末端进行标记，以简化测序工作流程。二代测序（NGS）中，PCR被广泛用于构建DNA测序文库。在NGS文库制备中，DNA样品通过PCR反应富集（在起始量有限的情况下）并使用adaptor（以及用于多重检测的index）标记。除了具有高保真度，DNA聚合酶还应具有***小的扩增偏好性，从而使测序文库具有高覆盖度。RT-PCR***盒-友名生物(推荐商家)由武汉友名生物技术有限公司提供。“商务服务”选择武汉友名生物技术有限公司，公司位于：湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701，多年来，友名生物坚持为客户提供好的服务，联系人：董先生。欢迎广大新老客户来电，来函，亲临指导，洽谈业务。友名生物期待成为您的长期合作伙伴！)