腺病毒载体-友名生物技术(图)
典型的腺病毒载体系统如:穿梭质粒pCA13/腺病毒***组质粒pBHG11/包装细胞293细胞。pCA13/的HCMVIE启动子-多克1隆位点-SV40AN(polyA)构成外源***的表达盒,该表达盒的插入使腺病毒E1***缺失,但是保留其两端侧翼序列(左侧的1~3bp的ITR,右侧从3.5kb到末端的维持病毒装配和活力必须的蛋白IX的***),腺病毒载体,也保留了腺病毒的包装信号φ(194~358bp);pBHG11则保留了腺病毒***组的绝大部分,但是缺失了包装信号φ、0.5~3.7图距(mu)部分的E1区、77.5~86.2mu的E3区,293细胞是整合有Ad5E1***的人胚shen细胞系。pBHG11因为缺失包装信号及E1区而不能copy,pCA13带有包装信号及E1的侧翼序列,但是缺失E1区及腺病毒绝大部分***组,同样不能copy。外源目的***插入pCA13后,与pBHG11共转染,进入293细胞。pCA13与pBHG11在细胞内发生同源重组,同时,293细胞提供E1蛋白,从而包装产生腺病毒颗粒。该病毒的蛋白质外壳同野1生型腺病毒相似,具有同样的感1染力进入靶1细胞的能力,但是***组DNA的E1区被外源目的***取代,即进入靶1细胞后病毒不能copy,但可以表达目的蛋白。农杆1菌转化法在植物遗传转化中的应用:过去认为受农bacillus宿主范围限制,农bacillus介导的遗传转化只限于双子叶植物。1987年Grimsly首先将玉米条斑病毒的cDNA克1隆至质粒上,用农bacillus侵染的方法将玉米条斑病毒的cDNA导入玉米,使植株表现了系统感1染症状。这个报道有力地证明了农bacillus能够侵染玉米这种单子叶植物。随着载体系统和转化方法的改进,农bacillus介导的遗传转化不再局限于双子叶植物,在一些单子叶植物如水稻、玉米和小麦等重要的农作物上也相继获得成功。进入20世纪90年代后,农杆1菌转化法在水稻、玉米等重要的农作物上取得突破性进展。首先是1991年Gould和Shen等利用农bacillus转化玉米茎尖分生***获得转0***植株。1998年Lupotto也实现了农bacillus转化玉米的成功,Southern杂交结果显示外源***能够稳定遗传到下一代。***转化法气动式***中具有代表性的是PDS-1000/He,利用由不同厚度的聚苯四甲酰亚1胺膜制成的可裂圆片来调控氦气压力。当氦气压力达到可裂圆片的临界承受压力时,可裂圆片破1裂并产生强烈的气流,使微弹载体携带微弹高速运动,遇到刚性的阻挡网,微弹载体被阻遏,而微弹利用惯性继续向前高速运动,轰击靶1细胞或***,从而携带外源***进入细胞内。***法不再受到受体***型的限制,又能避开原生质体再生的障碍,从而使植物的遗传转化翻开了新的一页。***转化法在植物遗传转化中的应用:应用***法转化***早的是Klein等人在1987年将携带有***氯霉1素乙酰转移酶(cat)***的烟1草花叶病毒的RNA导入洋葱的表皮细胞,使此***得到表达。后来,随着对物理参数(如金属粒子的理化特性、DNA与金属粒子的结合和靶***特性等)、环境条件(如受体植株、外植体和靶***所适宜的温度、湿度和光照等)和生物因子(如外植体及其轰击前后的培养条件等)等的技术优化,不断完善的***转化技术能实现对许多受体材料的转化,包括原生质体、悬浮细胞系、愈伤***、外植体(幼穗、幼胚或成熟胚),甚至可以直接轰击转化花粉。腺病毒载体-友名生物技术(图)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司实力不俗,信誉可靠,在湖北武汉的其它等行业积累了大批忠诚的客户。友名生物带着精益求精的工作态度和不断的完善创新理念和您携手步入辉煌,共创美好未来!)