限制性内切酶对环状质粒DNA产生的酶切片段数与切口数一致。因此，鉴定酶切后的片段在电泳凝胶的区带数，就可以推断切口的数目;从片段迁移率可判断酶切片段大小。用已知分子量的线状DNA为对照，通过电泳迁移率的比较，可以粗略地测出分子形状相同的未知DNA的相对分子大小。质粒DNA的相对分子量(Mr)一般在106～107范围内，如质粒pBR的相对分子质量为2.8×106，在细胞内有三种构型：①共价闭环DNA，常以超螺旋形式存在;②如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫作开环DNA;③双链线状DNA由于两条链的切口在同一部位被切断，不能成环，完全开放成线状，简称线性DNA。如果要测定质粒DNA的相对分子量，快切酶，建议把质粒用单一切口的酶水解得到线性DNA部分片段。三种构型的质粒DNA在电泳时的泳动速度为：共价闭环DNA>线状DNA>开环DNA。DNA部分片段的连接DNA部分片段通过用每一种限制性内切酶过量消化底物DNA而获得。这些片段随后用T4DNA连接酶连接(5′末端浓度为0.1-1.0μM)。连接的片段然后用同一种限制性内切酶重切。仅当3′和5′末端都保留完整，连接反应才会发生;而且只有那些识别位点完全***的分子才能被重切。切割后正常的带型说明3′和5′末端都是完整的，而且准备的酶样品中检测不到核酸外切酶和磷酸酶。限制性核酸内切酶是可以识别并附着特定的核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。根据限制酶的结构，辅因子的需求切位与作用方式，可将限制酶分为三种类型，分别是型（TypeI）、第二型（TypeII）及第三型（TypeIII）。Ⅰ型限制性内切酶既能催化宿主DNA的化，又催化非化的DNA的水解；而Ⅱ型限制性内切酶只催化非化的DNA的水解。Ⅲ型限制性内切酶同时具有修饰及认知切割的作用。快切酶-友名生物(推荐商家)由武汉友名生物技术有限公司提供。行路致远，砥砺前行。武汉友名生物技术有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴，更矢志成为其它具有竞争力的企业，与您一起飞跃，共同成功!)