RNA提取***-武汉友名生物
棉花等酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法:1取2g新鲜幼嫩的叶片放入研钵中,加入液氮后快速、充分研磨,待成极细的粉末状时迅速转入到50ml离心管中。2在50ml离心管中加入10ml冰预冷的提取缓冲液,在涡悬振荡器上充分混匀。3于4℃,2700×g离心20分钟,倒去上清液。4在沉淀中加入5ml裂解缓冲液,在涡旋振荡器上充分混匀。5于65℃水浴锅中温育30min。6加入5ml氯1仿/异戊1醇(24/1),并上下翻转以充分混合。7于4℃,2700×g离心5分钟。8转移上层水相至一新的50ml离心管中。9重复步骤7-9一次。10加入2/3体积的冰预冷的异丙1醇,并上下翻转以充分混合,至-20℃2h。11于4℃,1200×g离心10min。12在一新管中加入20ml含80%乙醇15mmol/LNaAc溶液,用玻棒将DNA转入该管(如不能直接用玻棒缠出,可离心后倒出上清,再在其中加入20ml含80%乙醇15mmol/LNaAc溶液),放置20min后稍许离心,移走上清并吸出残存乙醇,室温干燥。13加入10mlTE(10mmol/LTris-HClPH=80,RNA提取***,1mmol/LEDTA)并加入终浓度为20(g/L的RNaseA,过夜。14风干,用50μlTE缓冲液溶解,存于-20℃备用。DNA提取***盒是根据氯化芐法构建的,能够从样本中提取***组DNA的***盒。氯化1苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化,从而***细胞壁的特性。本制品利用了氯化1苄的这一特性,将植物样品***融解后,再使用PipetTip的尖1端将植物样品在Microtube壁上数次按压即可***细胞壁。本法与传统方法相比,省去了液氮研磨等烦琐步骤,有利于一次性处理大量样品。而且,本制品经过了改良,热处理时间只需15分钟,使用本制品从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的***组DNA可以进行PCR扩增及限制酶处理等。DNA提取***盒主要可以分为以下几大类:小量全血***组DNA提取***盒、中量全血***组DNA提取***盒、***/细胞***组DNA提取***盒、中量/大量***/细胞***组DNA提取***盒、全血/***/细胞***组DNA提取***盒、CTAB植物***DNA提取***盒、新型植物***组DNA提取***盒、酵母***组DNA提取***盒、M13噬菌体单链***组DNA提取***盒。如何确认RNA的质量实时荧光定量PCR技术是通过测定RNA的转录水平来评估***的活力。RNA样本提取的质量直接影响***表达分析。影响RNA品质的因素有以下三种:RNA浓度、RNA纯度和RNA完整性。检测RNA浓度、纯度和完整性的方式主要有以下几种:紫外分光光度计法:测量260nm吸收值计算RNA浓度,测量260nm/280nm吸收值的比值,用于评估RNA纯度。需要注意的是:在检测核酸物质时应该在固定的PH溶液中进行。260nm/280nm的比值范围在1.9~2.1之间。<1.9,说明有蛋白质残留;>2.1,说明RNA可能发生降解。琼脂糖凝胶电泳:完整的RNA通常有三条带,***亮的是28S条带,其次是18S条带,***淡的是5S条带(部分***盒提取时会过滤掉5S条带)。通过琼脂糖凝胶电泳可以检测28S和18S的比值。该方法主要用于检测RNA的纯度和完整性。如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利,28S的亮度在18S条带的两倍以上,我们认为RNA的质量***好。若RNA条带出现弥散,原因可能:RNA被核酸酶降解、电压或电流过大、上样量过高或过低等。RNA提取***-武汉友名生物由武汉友名生物技术有限公司提供。“商务服务”选择武汉友名生物技术有限公司,公司位于:湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701,多年来,友名生物坚持为客户提供好的服务,联系人:董先生。欢迎广大新老客户来电,来函,亲临指导,洽谈业务。友名生物期待成为您的长期合作伙伴!)