PCR反应五要素参加PCR反应的物质主要有五种即引物(PCR引物为DNA部分片段，细胞内DNA复1制的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)。[PCR步骤]标准的PCR过程分为三步:1.DNA变性(90°C-96*C):双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA2.退火(25C-65C):系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3.延伸(70°C-75*C):在Taq酶(在72C左右，活性***佳)的作用下，以dNTP为原料，从引物的5端→3端延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是***佳也能在很短的时间内copy完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60°C-65C间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。巢式PCR(NESTPCR枝术.先用一对靶序列的外引物扩增以提高模板量.然后再用一对内引物扩增以得到特异的PCR带。此为巢式PCR。若用一条外引物作内引物则称之为半巢式PCR。为减少巢式PCR的操作步骤可将外引物设计得比内引物长些，且用量较少。同时在第yi次PCR时采用较高的退火温度而第二次采用较低的退火温度。这样在第yi次PCR时，由于较高退火温度下内引物不能与模板结合，故只有外引物扩增产物，经过若干次循环。待外引物基本消耗尽，无需取出第yi次PCR产物，只需降低退火即可直接进行PCR扩增。这不仅减少操作步骤。同时也降低了交叉污染的机会。这种PCR称中途进退式PCR(drop-in，drop-outPCR)上述三种方法主要用于少量DNA模板的扩增。pcr扩增的原理实验方法原理①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在Taq酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，PCR预混液，按碱基配对与半保留copy原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复1制链。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复1制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的***扩增放大几百万倍。典型的PCR包括高温变性、低温退火、中温延伸三个步骤，通过将这一套过程不断循环，使DNA得以成百万倍的扩增。PCR预混液-友名生物(推荐商家)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司位于湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前友名生物在其它中享有良好的声誉。友名生物取得全网商盟认证，标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。友名生物全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。)