以RibocloneM-MLVCDNA合成技术为例。RibocloneM—MLVcDNA合成系统采用M—MLV反转录酶的RNaseH缺失突变株取代AMV反转录酶，使合成的cDNA更长。该系统的链合成使用M-MLV反转录酶，cDNA第二链合成采用置换合成法，采用RNaseH和DNA聚合酶I进行置换合成，用T4DNA聚合酶切去单链末端，方法简便易行。当DNA聚合酶III沿着滞后链模板移动时，由特异的引发酶催化合成的RNA引物即可以由DNA聚合酶III所延伸，合成DNA。当合成的DNA链到达前一次合成的冈崎片段的位置时，滞后链模板及刚合成的冈崎片段从DNA聚合酶III上释放出来。由于copy叉继续向前运动，便又产生了一段单链的滞后链模板，它重新环绕DNA聚合酶III，通过DNA聚合酶III开始合成新的滞后链冈崎片段。通过这种机制，前导链的合成不会超过滞后链太多，这样引发体在DNA链上和DNA聚合酶III以同一速度移动。在copy叉附近，形成了以DNA聚合酶III二聚体、引发体和解旋酶构成的类似核糖体大小的以物理方式结合成的复合体，称为DNAcopy体。copy体在DNA前导链模板和滞后链模板上移动时便合成了连续的DNA前导链，以及由许多冈崎片段组成的滞后链。当冈崎片段形成后，DNA聚合酶I通过其5→3外切酶活性切除冈崎片段上的RNA引物，并利用后一个冈崎片段作为引物由5→3合成DNA填补缺口。***后由DNA连接酶将冈崎片段连接起来，形成完整的DNA滞后链。长***组序列、特别是包含大的***簇的那些的克1隆对于产生medicine和生物燃料的合成生物学和***工程工作特别重要。传统的基于PCR的克1隆方法通常受限于DNA模板的长度和GC含量：标准的PCR反应常规产生至多10kb的片段，而更长的PCR产物需要反应条件的繁琐优化，并且甚至在理想条件下，通常受限于35kb5。或者，可通过装配多个短片段，例如重叠PCR产物或化学合成的DNA寡聚物，产生长的目的***组序列，但这样的方法趋于耗时和昂贵，加A尾***盒，特别是对于获得长于50kb的序列(其通常需要3-5阶段，每个包含多个装配事件)6，7。获得长的***组序列的另一方法是通过***组DNA的限制性酶消化。武汉友名生物公司(多图)-加A尾***盒由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司坚持“以人为本”的企业理念，拥有一支高素质的员工***，力求提供更好的产品和服务回馈社会，并欢迎广大新老客户光临惠顾，真诚合作、共创美好未来。友名生物——您可信赖的朋友，公司地址：湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701，联系人：董先生。)