腺病毒提取-友名生物技术
腺病毒表达腺病毒系统是很受欢迎的可以在任何哺乳动物细胞中有效瞬时表达的基因递送平台。对于难转染的细胞,如原代或非分裂细胞,采用病毒递送外源基因的方式是非常有效的选择。钟鼎生物采用293A腺病毒包装细胞系(含有腺病毒包装所必需的E1基因序列,是专为生产腺病毒和进行滴度测定而建立的),用于高滴度的copy缺陷型(E1和E3缺失)腺病毒的生产,以进行外源基因的表达。腺病毒感1染几乎所有的细胞类型,除了一些抗腺病毒感1染的淋巴1瘤细胞。腺病毒是研究原代非增殖细胞基因表达的zui佳系统,它可以使转化细胞和原代细胞中得到的结果直接进行对比;不整合到染色体中,无插入致突变性。能有效进行增殖,滴度高:腺病毒系统可产生108pfu/ml原液,浓缩后可达1010-1011VP/ml,这一特点使它非常适用于基因cure。腺病毒分离与鉴定1.分离培养标本应尽早从感1染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物,粪便和尿液等,加抗1生素处理过夜,离心取上清接种敏感细胞(293、Hep-2或HeLa细胞等),37℃孵育后可观察到典型CPE,即细胞变圆、团聚、有拉丝现象,较突出的表现是许多病变细胞聚在一起呈葡萄串状。2.病毒鉴定用荧光标记的抗六邻体抗1体与分离培养细胞作用来鉴定腺病毒,也可用血凝抑制(hemoagglutinationinhibition,HI)试验或中和试验(neutralizationtest)检测属和组特异性抗原并鉴定病毒的血1清型。腺病毒可用Shellvial技术进行快速鉴定。病毒标本经抗1生素和离心处理,取上清接种于有细胞的Shellvial培养瓶,腺病毒提取,孵育1~2天,用特异性六邻体单克1隆抗1体对其抗原表位进行检测。也可用病1人鼻粘膜上皮脱落细胞直接染色检测病毒抗原。用DNA杂交或内切酶酶切等鉴定分离培养的病毒DNA;PCR可用于腺病毒感1染的诊断,引物设计主要根据腺病毒六邻体、VAI和VAII编码区序列,能检测所有血1清型,而且其敏感性很高,能检测某些patient潜在的腺病毒。用腺病毒41型BgIII-D片段作探针诊断腺病毒腹泻,其检出率可达80%。腺病毒传播特点宿主范围广对人致病性低,腺病毒载体系统可广泛用于人类及非人类蛋白的表达。腺病毒可感1染一系列哺乳动物细胞,因此在大多哺乳动物细胞和组织中均可用来表达重组蛋白。特别需要指出的是:腺病毒具有嗜上皮细胞性,而人类的大多数的肿1瘤就是上皮细胞来源的。另外,腺病毒的copy基因和致病基因均已相当清楚,在人群中早已流行(70-80%成人体内都有腺病毒的中和抗1体存在)。人类感1野1生型腺病毒后仅产生轻微的自限性症状,且病毒唑cure有效。腺病毒提取-友名生物技术由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司拥有很好的服务与产品,不断地受到新老用户及业内人士的肯定和信任。我们公司是商盟认证会员,点击页面的商盟客服图标,可以直接与我们客服人员对话,愿我们今后的合作愉快!)