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无细胞系统是利用细胞提取物(而不是细胞)进行***转录和翻译的系统。一个无细胞***表达系统主要包括三个部分:细胞提取物,反应混合液,以及核酸模板1.细胞提取物:从细胞中提取的物质,主要包含核糖体、RNA聚合酶、其他转录和翻译蛋白(比如σ因子、起始因子和延伸因子),以及用于能量代谢的酶和辅因子。在有些菌株的提取物中,可能***了蛋白酶和核酸酶的活性。2.反应混合液:包含蛋白质合成所需的一些原料,如氨基酸、核苷酸、盐离子(如铵盐、镁、钾)、能源(糖类、磷酸肌酸等)、拥挤***(crowdingagents)、代谢辅因子(辅酶A、NAD)、缓冲液、tRNA以及其他代谢添加剂等。3.核酸模板:可以是质粒DNA或PCR产物线装DNA,浓度通常在1-20nM。无细胞系统一般的反应体积为10微升,但是根据其实际应用,反应体系可以从10^(-15)到10^3变化。在开始反应时,将三种组分在16-37℃下孵育,蛋白质合成将在1-24h内进行。蛋白质在胃液消化酶的作用下,初步水解,在中完成整个消化吸收过程。氨基酸的吸收通过黏膜细胞,是由主动运转系统进行,蛋白质折叠***盒,分别转运中性、酸性和碱性氨基酸。在肠内被消化吸收的蛋白质,不仅来自于食物,也有肠黏膜细胞脱落和消化液的分泌等,每天有70g左右蛋白质进入消化系统,其中大部分被消化和重吸收。未被吸收的蛋白质由粪便排出体外。微量凯氏(kjeldahl)定氮法样品与浓1***共热。含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与***作用,变成***氨。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例,其反应式如下:NH2CH2COOH+3H2SO4――2CO2+3SO2+4H2O+NH3(1)2NH3+H2SO4――(NH4)2SO4(2)(NH4)2SO4+2NaOH――2H2O+Na2SO4+2NH3(3)反应(1)、(2)在凯氏瓶内完成,反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化,可以加入CuSO4作催化剂,K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液,滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量,如欲求得样品中蛋白含量,应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量,即用样品中蛋白氮乘以6.25即得。蛋白质折叠***盒-友名生物(推荐商家)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司是从事“商务服务”的企业,公司秉承“诚信经营,用心服务”的理念,为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询!联系人:董先生。)