自身引导法。合成的单链eDNA3’端能够形成一短的发夹结构，这就为第二链的合成提供了现成的引物。当链合成反应产物的DNA—RNA杂交链变性后利用大肠DNA聚合酶IKlenow片段或反转录酶合成eDNA第二链，用对单链特异性的S1核酸酶消化该环，RACE，即可进一步。但自身引导合成法较难控制反应，而且用S1核酸酶切割发夹结构时无一例外地将导致对应于mRNA5’端序列出现缺失和重排，因而该方法很少使用。DNAcopy主要的特点是半保留copy、半不连续copy。在copy过程中，原来双螺旋的两条链并没有被***，它们分成单独的链，每一条旧链作为模板再合成一条新链，这样在新合成的两个DNA分子中，一条链是旧的而另外一条链是新的，因此这种copy方式被称为半保留copy。DNA的两条链是反向平行的，一条是5→3方向，另一条是3→5方向。在copy起点处，两条链解开形成copy泡(replicationbubble)，DNA向两侧copy形成两个copy叉(replicationfork)。随着DNA的不断解旋，两条链变成单链形式，可以作为模板合成新的互补链。但是，生物细胞内所有的DNA聚合酶都只能催化5→3延伸。因此，以3→5的链为模板链时，DNA聚合酶可以沿5→3的方向合成互补的新链，这条链称为前导链(leadingstrand)。当以另一条链为模板时则不能连续合成新链，这条链称为滞后链(laggingstrand)。这时，DNA聚合酶从copy叉的位置开始向远离copy叉的方向合成1?2kb的新链片段，待copy叉向前移动相应的距离后，又重复这一过程，合成另一个类似大小的新链片段，这些片段被称为冈崎片段(Okazakifragment)。***后，由另一种DNA聚合酶和DNA连接酶负责把这些冈崎片段之间的RNA引物除去，并把缺口补平，使冈崎片段连成完整的DNA链。这种前导链的连续copy和滞后链的不连续copy在生物细胞中是普遍存在的，称为DNA的半不连续copy。DNA连接酶与DNA聚合酶用途不同DNA连接酶主要用于***工程，将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合，故也称“***针线”。如***工程中，大肠杆1菌连接酶连接黏性末端，T4连接酶既可连接黏性末端，又可连接平末端。DNA聚合酶在DNAcopy中起做用，主要是连接DNA部分片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。RACE-友名生物(推荐商家)由武汉友名生物技术有限公司提供。RACE-友名生物(推荐商家)是武汉友名生物技术有限公司今年新升级推出的，以上图片仅供参考，请您拨打本页面或图片上的联系电话，索取联系人：董先生。)