PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：必要时重新设计引物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。适当提高退火温度或采用二温度点法（93℃变性，65℃左右退火与延伸）。梯度PCR仪把一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（温度梯度），通常12钟温度梯度，这样的仪器就叫梯度PCR仪。工作模式和原理同普通PCR仪一样，它出了又普通PCR仪的功能外还多了一个梯度退火功能。DNA部分片段的扩增对温度的控制精度要求特别高，不同的DNA部分片段其退火温度不一样，通过计算DNA部分片段中的CG碱基的含量只能初步的判断出***优退火温度在+5℃范围内，一步法RT-PCR***盒，如果用普通PCR仪进行研究，需重复扩增很多次，然后做电泳进行分析来确定***优退火温度。而梯度PCR仪则只需要一次就可以完成，在节省了时间的同时提高了实验的可靠性和准确性。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增，这样节约成本的同时也节约了时间和经费。在不设置梯度的情况下，梯度PCR仪也可以做普通PCR扩增。该仪器主要应用于科研，教学机构，***临床研究，高等院校，病毒分析，疾控中心等。污染原因：1、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。2、PCR***的污染：主要是由于在PCR***配制过程中，由于加样、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。3、PCR扩增产物污染：这是PCR反应中主要常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大（一般为1013拷贝/ml），远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可形成假阳性。还有一种容易忽视，可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染。在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。4、实验室中质粒的污染：在分子生物学实验室及某些用质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见。因为质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及***，而且在内的质粒，由于的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力。其污染可能性也很大。一步法RT-PCR***盒-武汉友名生物由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司是一家从事“商务服务”的公司。自成立以来，我们坚持以“诚信为本，稳健经营”的方针，勇于参与市场的良性竞争，使“友名生物”品牌拥有良好口碑。我们坚持“服务至上，用户至上”的原则，使友名生物在其它中赢得了客户的信任，树立了良好的企业形象。特别说明：本信息的图片和资料仅供参考，欢迎联系我们索取准确的资料，谢谢！)