在条件都得到满足的情况下，杂交的成败就取决于保温时间。时间短了，杂交反应不完成；时间长了也无益，会引起非特异结合增多。一般杂交反应要进行20h左右。1966年Britten和Kohne推荐用Cot=值来计算杂交反应时间。Cot值实际上是杂交液中单链起始浓度（Co）和反应时间（t）的乘积。实验表明Cot=100时，杂交反应基本完成。Cot=0，基本上没有杂交。例如在液相杂交中未标记的DNA400μg/ml（按单股DNA每微克紫外吸收值为0.024计算，总的吸收值为9.6），如果反应时间为21h，那么对于未标记的DNA来说，Cot=9.6/21=100.8，杂交完成了。对标记DNA（浓度为0.1μg/ml）来说Cot值为0.05，这就充分排除了标记DNA的自我复性。Tm值25℃时杂交***佳，所以首先要根据公式（4）计算杂交体Tm值。由此式可见，通过调节盐浓度、甲酰胺浓度和杂交温度来控制所需的严格性。在选择探针类型的同时，还需要选择标记方法。探针的标记方法很多，选择什么标记方法主要视个人的习惯和可利用条件而定。但在选择标记方法时，还应考虑实验的要求，如灵敏度和显示方法等。一般认为放0射性探针比非放0射性探针的灵敏度高。放0射性探针的实际灵敏度不依赖于所采用的标记方法，如随机引物延伸法往往得到比缺口平移法更高的比活性。在检测单拷贝***序列时，应选用标记效0率0高、显示灵敏的探针标记方法。在对灵敏要求不高时，原位杂交，可采用保存时间长的生物素探针技术和比较稳定的碱性磷酸酶显示系统。原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或***切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精3确定量***的过程。原位杂交可以在细胞标本或***标本上进行。原位杂交技术(Insituhybridization，ISH)是分子生物学、***化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术，始于20世纪60年代。原位PCR；原位杂交细胞***和PCR的高灵敏度相结合的技术，在细胞（爬片、甩片或涂片）或***（石蜡、冰冻切片）上直接对靶***片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。武汉思特进科技公司-原位杂交由武汉思特进科技发展有限公司提供。“动植物，***，细胞生物实验”选择武汉思特进科技发展有限公司，公司位于：湖北省武汉市江夏区高新四路40号葛洲坝，多年来，思特进坚持为客户提供好的服务，联系人：夏经理。欢迎广大新老客户来电，来函，亲临指导，洽谈业务。思特进期待成为您的长期合作伙伴！)