原位杂交试验收集斑马鱼的胚胎，在Holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小时后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗，然后换成甲9醇，在-20C保存，待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧6水处理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养，可阻断色素的形成)惰性多聚体可用来促进250个碱基以上的探针的杂交率。对单链探针可增加3倍，而对双链探针、随机剪切或随机引物标记的探针可增加高达100倍。而短探针不需用促进剂，因其复杂度低和分子量小，短探针本身的杂交率就高。***葡聚糖是一种广泛用于较长双链探针杂交的促进剂。这是一种多聚胺，平均分子量为500000。另一种常见的促进剂是聚乙二醇（PEG），PEG分子量小（6000～8000）、粘度低、价格低廉，但它不能完成取代***葡聚糖。在某些条件下5%～10%***葡聚糖效果较好，若用5%～10%PEG则可产生很高的本底。因此，使用促进剂时有必要优化条件。在条件都得到满足的情况下，杂交的成败就取决于保温时间。时间短了，杂交反应不完成；时间长了也无益，会引起非特异结合增多。一般杂交反应要进行20h左右。1966年Britten和Kohne推荐用Cot=值来计算杂交反应时间。Cot值实际上是杂交液中单链起始浓度（Co）和反应时间（t）的乘积。实验表明Cot=100时，杂交反应基本完成。Cot=0，基本上没有杂交。例如在液相杂交中未标记的DNA400μg/ml（按单股DNA每微克紫外吸收值为0.024计算，荧光原位杂交，总的吸收值为9.6），如果反应时间为21h，那么对于未标记的DNA来说，Cot=9.6/21=100.8，杂交完成了。对标记DNA（浓度为0.1μg/ml）来说Cot值为0.05，这就充分排除了标记DNA的自我复性。Tm值25℃时杂交***佳，所以首先要根据公式（4）计算杂交体Tm值。由此式可见，通过调节盐浓度、甲酰胺浓度和杂交温度来控制所需的严格性。荧光原位杂交-思特进(推荐商家)由武汉思特进科技发展有限公司提供。“动植物，***，细胞生物实验”选择武汉思特进科技发展有限公司，公司位于：湖北省武汉市江夏区高新四路40号葛洲坝，多年来，思特进坚持为客户提供好的服务，联系人：夏经理。欢迎广大新老客户来电，来函，亲临指导，洽谈业务。思特进期待成为您的长期合作伙伴！)