出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个***组或大片段的交叉污染，防污染探针法定量，导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决：操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样内或溅出离心管外。除酶及不能耐高温的物质外，所有***或器材均应高压消毒。所用离心管及样进头等均应一次性使用。必要时，在加标本前，反应管和***用紫外线照射，以***存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染，这些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，与引物互补后，可扩增出PCR产物，而导致假阳性的产生，可用巢式PCR方法来减轻或消除。不对称PCR(asymmetricPCR）枝术两种引物浓度比例相差较大的PCR技术称不对称PCR.在扩增循环中引入不同的引物浓度.常用50~100+1比例。在起初的10~15个循环中主要产物还是双链DNA.但当低浓度引物被消耗尽后。高浓度引物介导的PCR反应就会产生大量单链DNA.应用:可制备单链DNA部分片段用于序列分析或核酸杂交的探针。反转录PCR(reversetranscription，RT-PCR技术当扩增模板为RNA时。需先通过反转录酶将其反转录为cDNA才能进行扩增。RT-PCR应用非常广泛。无论是分子生物学还是临床检验等都经常采用。修饰引物PCR技术为达到某些特殊应用目的.如定向克1隆、定1点突变、体外转录及序列分析等。可在引物的5*-端加上酶切位点、突变序列、转录启动子及序列分析结合位点等。PCR反应特点灵敏度高：PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12）量级的起始待测模板扩增到微克（μg=-6）水平。能从100万个细胞中检出一个靶1细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位）；在***学中***小检出率为3个***。简便、快速：PCR反应用耐高温的TaqDNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放1射性污染、易推广。纯度要求低：不需要分离病毒或***及培养细胞，DNA粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活***等DNA扩增检测。防污染探针法定量-友名生物公司(图)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司是湖北武汉,其它的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、创新发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在友名生物***携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈，共创友名生物更加美好的未来。)