内切酶-友名生物(在线咨询)
DNA限制性内切酶酶切是一项基于DNA限制性内切酶的***工程技术,其基本原理是利用限制性内切酶对DNA上特定序列的识别,来确定切割位点并实现切割,从而获得所需的特定序列。生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶,即能够限制异源DNA的***并使之失去活力,内切酶,但对自己的DNA却无损害作用,这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的,故名限制性内切酶(简称限制酶)。限制性内切酶对环状质粒DNA产生的酶切片段数与切口数一致。因此,鉴定酶切后的片段在电泳凝胶的区带数,就可以推断切口的数目;从片段迁移率可判断酶切片段大小。用已知分子量的线状DNA为对照,通过电泳迁移率的比较,可以粗略地测出分子形状相同的未知DNA的相对分子大小。质粒DNA的相对分子量(Mr)一般在106~107范围内,如质粒pBR的相对分子质量为2.8×106,在细胞内有三种构型:①共价闭环DNA,常以超螺旋形式存在;②如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂,分子就能旋转而消除链的张力,这种松弛型的分子叫作开环DNA;③双链线状DNA由于两条链的切口在同一部位被切断,不能成环,完全开放成线状,简称线性DNA。如果要测定质粒DNA的相对分子量,建议把质粒用单一切口的酶水解得到线性DNA部分片段。三种构型的质粒DNA在电泳时的泳动速度为:共价闭环DNA>线状DNA>开环DNA。限制酶分布区域限制性核酸内切酶分布极广,几乎在所有***的属、种中都发现至少一种限制性内切酶,多者在一属中就有几十种,例如在嗜血杆1菌属中(Haemophilus)现已发现的就有22种。有的菌株含酶量极低,很难分离定性;然而在有的菌株中,酶含量极高.如E.coli的pMB4(EcoRI酶)和H.aegyptius(HalⅢ酶)就是高产酶菌株。据报道从10g的H.aegyptius的细胞中,能分离提纯出可消化l0gλ噬菌体DNA的酶量。***是限制性内切酶,尤其是特异性非常强的I类限制性内切酶的主要来源。内切酶-友名生物(在线咨询)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司实力不俗,信誉可靠,在湖北武汉的其它等行业积累了大批忠诚的客户。友名生物带着精益求精的工作态度和不断的完善创新理念和您携手步入辉煌,共创美好未来!)
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