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cDNA是指具有与某RNA链呈互补碱基序列的DNA。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)作用而合成,并且在合成单链cDNA后,再用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶作用合成双链cDNA。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来的***组DNA相同而且无内含子;相反地,对应于在原来***中没有的而在mRNA存在的3末端的polyA序列等的核苷序列上,与外显子序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。以RibocloneM-MLVCDNA合成技术为例。RibocloneM—MLVcDNA合成系统采用M—MLV反转录酶的RNaseH缺失突变株取代AMV反转录酶,使合成的cDNA更长。该系统的链合成使用M-MLV反转录酶,cDNA第二链合成采用置换合成法,采用RNaseH和DNA聚合酶I进行置换合成,用T4DNA聚合酶切去单链末端,加A尾***盒,方法简便易行。自身引导法。合成的单链eDNA3’端能够形成一短的发夹结构,这就为第二链的合成提供了现成的引物。当链合成反应产物的DNA—RNA杂交链变性后利用大肠DNA聚合酶IKlenow片段或反转录酶合成eDNA第二链,用对单链特异性的S1核酸酶消化该环,即可进一步。但自身引导合成法较难控制反应,而且用S1核酸酶切割发夹结构时无一例外地将导致对应于mRNA5’端序列出现缺失和重排,因而该方法很少使用。加A尾***盒-友名生物(推荐商家)由武汉友名生物技术有限公司提供。“商务服务”选择武汉友名生物技术有限公司,公司位于:湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701,多年来,友名生物坚持为客户提供好的服务,联系人:董先生。欢迎广大新老客户来电,来函,亲临指导,洽谈业务。友名生物期待成为您的长期合作伙伴!)