农杆1菌转化法在植物遗传转化中的应用：过去认为受农bacillus宿主范围限制，农bacillus介导的遗传转化只限于双子叶植物。1987年Grimsly首先将玉米条斑病毒的cDNA克1隆至质粒上，用农bacillus侵染的方法将玉米条斑病毒的cDNA导入玉米，使植株表现了系统感1染症状。这个报道有力地证明了农bacillus能够侵染玉米这种单子叶植物。随着载体系统和转化方法的改进，农bacillus介导的遗传转化不再局限于双子叶植物，在一些单子叶植物如水稻、玉米和小麦等重要的农作物上也相继获得成功。进入20世纪90年代后，农杆1菌转化法在水稻、玉米等重要的农作物上取得突破性进展。首先是1991年Gould和Shen等利用农bacillus转化玉米茎尖分生***获得转0***植株。1998年Lupotto也实现了农bacillus转化玉米的成功，Southern杂交结果显示外源***能够稳定遗传到下一代。科学家在培养转0***植物时，常用什么中的质粒作为载体？（1）具有较小的分子量。经验表明，为了避免在DNA的纯化过程中发生链的断裂，克1隆载体的分子大小建议不要超过10Kb。pBR质粒这种小分子量的特点，不仅易于自身DNA的纯化，而且可容纳较大的外源DNA部分片段；（2）具有两种抗1菌素抗性***可供作转化子的选择记号，能指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞以及外源DNA分子是否插入载体分子形成了重组子。标记***往往可以赋予宿主细胞一种新的表型，这种转化细胞可明显地区别于非转化细胞。当我们把一个DNA部分片段插入到某一个标记***内时，该***就失去了相应的功能。当把这种重组DNA分子转到宿主细胞后，该***原来赋予的表型也就消失了。要是仍保留了原来表型的转化细胞，细胞内含有的DNA分子一定不是重组子。很显然，既要指示外源DNA是否进入了宿主细胞，又要指示载体DNA分子中是否插入了外源DNA部分片段，那么这种载体必须至少具有两个标记***。另外，pBR质粒载体还具较高的拷贝数，而且经过氯霉1素扩增之后，每个细胞中可积累1000~3000个拷贝，这就为重组体DNA的制备提供了极大的方便。***导入细胞常用方法转染重组的噬菌体DNA也可象质粒DNA的方式进入宿主菌，即宿主菌先经过C***2，电穿孔等处理成感受态***再接受DNA，进入感受态***的噬菌体DNA可以同样copy和繁殖，这种方式称为转染（transfection）。M13噬菌体DNA导入大肠杆1菌就常用转染的方法。重组DNA进入宿主细胞也常用转染方式。***经典的是1973年建立的磷酸钙法，植物载体，其利用的基本现象是：DNA如以磷酸钙-DNA共沉淀物形式出现时，培养细胞摄取DNA的效率会显著提高。用电穿孔法处理培养的哺乳类细胞也能提高细胞摄取DNA能力，但所用外加电场的强度、电脉冲的长度等条件与处理***者都很不相同。用人工脂质膜包裹DNA，形成的脂质体可以通过与细胞膜融合而将DNA导入细胞，方法简单而有效，但缺点是有细胞毒性和血1清的不亲和性，近年来人们发现了一种更为有效的转染***－阳离子聚合物，其克服了脂质体转染***细胞毒性大，在体内易被血1清清除等缺点，具有转染效率1高，操作简单而日益受到重视。植物载体-友名生物(推荐商家)由武汉友名生物技术有限公司提供。“商务服务”选择武汉友名生物技术有限公司，公司位于：湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701，多年来，友名生物坚持为客户提供好的服务，联系人：董先生。欢迎广大新老客户来电，来函，亲临指导，洽谈业务。友名生物期待成为您的长期合作伙伴！)