就DNA探针和RNA探针的比较，DNA探针在杂交过程中会出现探针双链之间退火的可能，也更倾向于在溶液中形成大分子的探针聚合体，从而影响其渗透能力。而RNA探针的应用，荧光原位杂交，将提高DNA-RNA杂交子的热稳定性。Tips：RNA探针因其单链、高分子结合力、可适应高温杂交的特性，其检测特异性和灵敏度均优于DNA探针。常用的RNA探针标记方法为构建质粒后进行转率合成。通过PCR扩增的方法，可以更方便地进行RNA探针的制备；RNA探针合成后，还需验证其对目标片段检测的灵敏度和特异性。在条件都得到满足的情况下，杂交的成败就取决于保温时间。时间短了，杂交反应不完成；时间长了也无益，会引起非特异结合增多。一般杂交反应要进行20h左右。1966年Britten和Kohne推荐用Cot=值来计算杂交反应时间。Cot值实际上是杂交液中单链起始浓度（Co）和反应时间（t）的乘积。实验表明Cot=100时，杂交反应基本完成。Cot=0，基本上没有杂交。例如在液相杂交中未标记的DNA400μg/ml（按单股DNA每微克紫外吸收值为0.024计算，总的吸收值为9.6），如果反应时间为21h，那么对于未标记的DNA来说，Cot=9.6/21=100.8，杂交完成了。对标记DNA（浓度为0.1μg/ml）来说Cot值为0.05，这就充分排除了标记DNA的自我复性。Tm值25℃时杂交***佳，所以首先要根据公式（4）计算杂交体Tm值。由此式可见，通过调节盐浓度、甲酰胺浓度和杂交温度来控制所需的严格性。原位杂交试验收集斑马鱼的胚胎，在Holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小时后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗，然后换成甲9醇，在-20C保存，待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧6水处理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养，可阻断色素的形成)荧光原位杂交-思特进(推荐商家)由武汉思特进科技发展有限公司提供。武汉思特进科技发展有限公司实力不俗，信誉可靠，在湖北武汉的办公、文教项目合作等行业积累了大批忠诚的客户。思特进带着精益求精的工作态度和不断的完善创新理念和您携手步入辉煌，共创美好未来！)