长***组序列、特别是包含大的***簇的那些的克1隆对于产生medicine和生物燃料的合成生物学和***工程工作特别重要。传统的基于PCR的克1隆方法通常受限于DNA模板的长度和GC含量：标准的PCR反应常规产生至多10kb的片段，而更长的PCR产物需要反应条件的繁琐优化，并且甚至在理想条件下，通常受限于35kb5。或者，外切酶III，可通过装配多个短片段，例如重叠PCR产物或化学合成的DNA寡聚物，产生长的目的***组序列，但这样的方法趋于耗时和昂贵，特别是对于获得长于50kb的序列(其通常需要3-5阶段，每个包含多个装配事件)6，7。获得长的***组序列的另一方法是通过***组DNA的限制性酶消化。磷酸化酶的性质糖基转移酶类下的一个组群，即专司催化磷酸解作用的一类酶总称。广泛分布于动物(肝、肌)、植物、微生物中，包括糖原磷酸化酶(glycogenphosphorylase，EC2.4.1.1，分子量3.7×105)、麦芽糖磷酸化酶(EC2.4.1.8.)、1，3-β-D-低聚葡聚糖磷酸化酶(EC2.4.1.30.)、海带二糖磷酸化酶(1aminaribiosephosphorylaseEC2.4.1.31.)、纤维糊精磷酸化酶(EC2.4.1.49.)、1，3-β-D-葡聚糖磷酸化酶(EC2.4.1.97.)、嘧1啶核苷磷酸化酶(EC2.4.2.2.)、尿苷磷酸化酶(EC2.4.2.3.)、胸腺嘧1啶磷酸化酶(EC2.4.2.4.)、鸟苷磷酸化酶(EC2.4.2.15.)等。例如很有代表性的磷酸化酶是糖原磷酸化酶，糖原在体内降解过程中，该酶是催化糖原还原性末端葡萄糖残基的d-1，4-糖苷键断裂，反应，生成1-磷酸葡萄糖和少了一个葡萄糖基的糖原分子(见图)。这类酶多数是作为生化***应用于研究。DNA连接酶主要用于产生新的核酸分子组合，及在将其连接到载体上这三个连续的步骤在连接酶的三个不同域进行，与双链DNA接触的各个域环绕DNA底物形成反应域。DNA连接酶主要用于产生新的核酸分子组合，以及在分子克1隆前将其连接到载体上。用于分子克1隆的DNA连接酶是***来源或者噬菌体编码。所有真***，无论是嗜热或嗜温，包含一个单一的连接酶***，编码NAD*-依赖型的酶(OliveraandLehman1967;Takahashietal.1984)。在连接反应的第yi步中，使用NAD的二磷酸作为磷酸1酐键和腺营基团转移到DNA连接酶赖氨酸残基的ε-氨基基团。腺苷酸残基然后转移到DNA底物的5-磷酰基末端，变得易于受到并列的3羟基基团的亲核攻击。这导致磷酸二酯键的形成，消去AMP，以及形成DNA链的共价连接。用于分子克1隆的DNA连接酶在连接非经典底物时能力有所不同，如平末端双链、DNA-RNA杂交体或单链DNA.这些以及其他的属性归纳于表5。分子克1隆中比较常用的催化体外连接的酶是T4噬菌体编码的DNA连接酶。外切酶III-友名生物(推荐商家)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司实力不俗，信誉可靠，在湖北武汉的其它等行业积累了大批忠诚的客户。友名生物带着精益求精的工作态度和不断的完善创新理念和您携手步入辉煌，共创美好未来！)