DNA部分片段的连接DNA部分片段通过用每一种限制性内切酶过量消化底物DNA而获得。这些片段随后用T4DNA连接酶连接(5′末端浓度为0.1-1.0μM)。连接的片段然后用同一种限制性内切酶重切。仅当3′和5′末端都保留完整，连接反应才会发生;而且只有那些识别位点完全***的分子才能被重切。切割后正常的带型说明3′和5′末端都是完整的，而且准备的酶样品中检测不到核酸外切酶和磷酸酶。限制性内切酶对环状质粒DNA产生的酶切片段数与切口数一致。因此，鉴定酶切后的片段在电泳凝胶的区带数，就可以推断切口的数目;从片段迁移率可判断酶切片段大小。用已知分子量的线状DNA为对照，通过电泳迁移率的比较，可以粗略地测出分子形状相同的未知DNA的相对分子大小。质粒DNA的相对分子量(Mr)一般在106～107范围内，如质粒pBR的相对分子质量为2.8×106，在细胞内有三种构型：①共价闭环DNA，常以超螺旋形式存在;②如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫作开环DNA;③双链线状DNA由于两条链的切口在同一部位被切断，不能成环，完全开放成线状，简称线性DNA。如果要测定质粒DNA的相对分子量，建议把质粒用单一切口的酶水解得到线性DNA部分片段。三种构型的质粒DNA在电泳时的泳动速度为：共价闭环DNA>线状DNA>开环DNA。限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类：Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰（甲1基化）作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子，然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成：一种为限制性内切核酸酶（限制酶），它切割某一特异的核苷酸序列；另一种为***的甲1基化酶，mRNA切割酶，它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克1隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA的基础。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列（如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列：5-G↓AATTC-3），有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中，有的在对称轴处切割，产生平末端的DNA部分片段（如***aⅠ：5-CCC↓GGG-3）；有的切割位点在对称轴一侧，产生带有单链突出末端的DNA部分片段称粘性末端，如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。mRNA切割酶-友名生物技术(图)由武汉友名生物技术有限公司提供。“商务服务”选择武汉友名生物技术有限公司，公司位于：湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701，多年来，友名生物坚持为客户提供好的服务，联系人：董先生。欢迎广大新老客户来电，来函，亲临指导，洽谈业务。友名生物期待成为您的长期合作伙伴！)