友名生物(多图)-内切酶
限制性内切酶已有百余种,每种酶有其特定的核苷酸序列识别特异性,酶的活性需Mg+2来激1活。不同的酶也有许多差别:有些酶除需Mg+2外,还需ATP等其他辅助因子的激1活;切割位点和识别序列间的距离不同;有的内切酶同时具有甲1基化作用。根据这些差别,可将限制性内切酶分为I、II和III种类型。II型限制性内切酶只需要二价镁离子的激1活,酶在其识别序列内切割双链DNA,产生的各种DNA部分片段具有相同的末端结构,而且大多数的II型酶可提供粘性未端,有利于片段再连接,大部分II型酶所识别的序列具有反向对称的结构,或称之回文结构。如EcoRI和HindIII的识别和切口分别为:EcoRI:G↓AATTCHindIII:A↓AGCTTTTCGA↑ACTTAA↑G质粒载体和外源DNA中限制酶切位点的性质如今,质粒载体中限制酶切位点的种类极为繁多,因而通常都有可能找到某种带限制酶切位点恰恰与外源DNA部分片段本身毫无二致的载体。这就具备一个不可1比拟的优点,也应是可以用相应的限制酶消化重组质粒崦回收外源DNA。另一种方案,则是把片段插入到载体中能产生匹配末端的任何位点中。例如,识别不同的六核苷酸的限制酶BamHl和BglⅡ产生具有相同突出末端的限制酶切片段,这样用BglⅡ消化而制备的外源DNA部分片段可以克1隆到用BanHl消化的质粒中。这通常会使接合序列不能被曾用于外源DNA或制备载体的任何一种酶所切开。然而很多清况下,用切点位于多克1隆序列侧翼的限制酶进行消化,可将片段从重组质粒中摘出。偶尔在质粒的以及外源DNA两端的限制酶切位点之间,内切酶,不可能找到“门当户对”的搭配关系。这时可用下面两种方案加以解决:1)在线状质粒末端和(或)外源DNA部分片段的末端接上合成在接头或衔接头。2)在得到控制的反应条件下,用大肠杆1菌DNA聚合酶IKlenow片段部分补平带3凹端的DNA部分片段。如第九章所讨论,这样常可以使那些不相匹配的限制酶切位点转变为互补末端,从而促进载体和外源DNA的连接。因为部分补平的反应消除了同一分子两端彼此配对的能力,故连接反应过程中环化和自身寡聚化的机会也会有所降低根据限制酶的结构,辅因子的需求切位与作用方式,可将限制酶分为三种类型,分别是第yi型(TypeI)、第二型(TypeII)及第三型(TypeIII)。第yi型限制酶同时具有修饰(modification)及认知切割(restriction)的作用;另有认知(recognize)DNA上特定碱基序列的能力,通常其切割位(cle***agesite)距离认知位(recognition)可达数千个碱基之远。例如:EcoB、EcoK。第二型限制酶只具有认知切割的作用,修饰作用由其他酵素进行。所认知的位置多为短的回文序列(palindromesequence);所剪切的碱基序列通常即为所认知的序列。是遗传工程上,实用性较高的限制酶种类。例如:EcoRI、HindIII。第三型限制酶与第yi型限制酶类似,同时具有修饰及认知切割的作用。可认知短的不对称序列,切割位与认知序列约距24-26个碱基对。例如:EcoPI、HinfIII。友名生物(多图)-内切酶由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司拥有很好的服务与产品,不断地受到新老用户及业内人士的肯定和信任。我们公司是商盟认证会员,点击页面的商盟***图标,可以直接与我们***人员对话,愿我们今后的合作愉快!)